偏光显微镜放大法

    1.普通光学偏光显微镜

    普通光学偏光显微镜(light microscope)以可见光(日光或灯光)为光源，波长0.4μm-0.7，平均约0.5μm,其分辨距离为光波波长的一半，即0.25μm。0.25μm的微粒经油镜放大1 000倍后成0.25mm一般而言，徽生物(除绝大多数病毒外)的直径都大于0.25μm，故可用普通光学显微镜予以观察。如在光镜上装配暗视野聚光器，则成为暗视野显微镜。观察时黑暗的背景中可看到发亮的国体，明暗反差提高了观察效果，多用于不易染色的微生物(如螺旋体等)的形态和运动观察。

    相差偏光显微镜利用相差板的光栅作用，能显示出徽生物结构不同部位的差异。可用于观察微生物的形态、内部结构、运动方式及繁殖过程，多用于偏光显微镜不易观察的不染色标本。荧光显微镜也是在普通光学显微镜的基础上，采用萦外光或蓝紫光为光源，配合荧光抗体染色，用于细菌自体荧光观察和荧光荫球的观察。

    2.电子偏光显微镜

    电子偏光显微镜(electron microscope, EM)是利用电子流代替可见光波，电磁圈代替放大透镜而组成的偏光显微镜。电子波长极短，约为。.005二。EM放大倍数可高达数十万倍，能分辨，run的徽拉。不仅能看清徽生物的外形.内部超徽结构也可一览无遗。电子偏光显微镜显示的图像，可投射到荧光屏上，也可拍成照片。

    当前使用的电子偏光显微镜有两类，即透射电子偏光显微镜(transmission electron microscope. TEM)和扫描电子偏光显微镜(scanning electron microscope, SEM), SEM的分辨率一般较TEM低，但可消楚地显示物体的三维立体图像。配合电子偏光显微镜观察使用的标本制备方法有磷钨酸或相酸筱负染色、投影法(shadowing，即以金属喷涂投影，增强对比度，使图像具有立体感)、超薄切片(ultrathin section)及冷冻蚀刻法(freeze etching)等。冷冻蚀刻法可更演晰地显示微生物内部的结构。电子偏光显微镜标本必须要放在真空干操的状态下检查，是不能应用于观察活的微生物。