滤色标本的影响

    当用相差体视显微镜观察吸收光的染色标本时，由振幅变化所引起的效果由于相板的扰乱是不会保留的，面这种细微结钩上反差的损失，不一定能被在标本变化基础上最终像反差的增大所补偿。特别是在标本具有高折射率部分的情况下，会受到轮和作用带的扰乱。一般来说，用相差体视显微镜观察染色的常规切片时，与常规的振幅差所形成的像相比，观察的结果被歪曲。并且本来就不是太好的像也可能完全被损坏。用染色标本观察所形成的像既不是一个真正的相差像，也不是一个常规的光吸收像。因此，实际上不吸收光的透明活体细心或组织是用于相差观察的最理想的标本。

    但是在有些情况下使用染色标本也可以得到较好的效果。在这里必须注意，无论使用何种染科，染色应该很淡，而且一般应染为单色，已褪色的陈旧标本往往成为相差体视显微镜较好的观察材料。此外，也可以使用活体染色的方法。在相差观察时。应该把观察结果与普通明视野结果进行比较，从各方面研究被观察物体的性质和结构。

    盖玻片和载玻片的影响

    用于相差观察的标本要盖上盖玻片，否则环状光阑的亮环与物镜相板的暗环很难重合，从而得不到适宜的反差，同时对玻片质量的要求也比较严格。如泉玻片有划痕、厚薄不均匀、成凸凹不平，亮环就会歪斜，从而严重影响像的质量。

    载玻片的厚度对像的质量也有较大影响，玻片过厚，环状光阑上的亮环变大，玻片过薄，亮环交小。连续观察几个标本时，如载玻片厚度不同，要每次调焦，非常麻烦。凹窝载玻片由于各部分的光程不同，不能用于相差显微观察。
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