1.将偏光显微镜的聚光器和接物镜换成相差聚光器和相差物镜，在光路上加绿色滤光片。

    2.聚光器转盘刻度“0”调节光称使视野亮度均匀。

    3.将酿酒酵母和大肠杆菌的培养物制备水浸片，于载物台上，用低倍物镜(10x)在明视野下调节亮度并聚焦样品。

    相差偏光显微镜检对载玻片、载玻片的要求很离。载玻片厚度应在1.0 mm左右，若过厚，环状光阑的亮环变大，过薄则亮环变小;载玻片厚薄不均，凸凹不平，或有划痕、尘埃等也都会影晌图像质量。而盖玻片的标准厚度通常为0.16-0.17mm，过薄或过厚都会使像差、色整增加，影响观察效果。

    4.将聚光器转盘刻度且“10”与所用10 x物镜相匹配)。注意由明视野转为环状光阑时，因进光暇减少，要把聚光器的光圈开足，以增加视野亮度。

    5.取下目镜，换上合轴调节望远镜。用左手指固定望远镜外筒一边观察一边用右手转动其内筒，使其升降，对焦使聚光器中的亮环和物镜中的暗环清晰;当双环分离时，说明不合轴。可用策光器的调中螺旋移动亮环，直至双环完全重合。

    6.按上法依次对其他放大倍数的物镜和相应的环状光附进行合轴调节。

    目镜的合轴调节是取得良好观察效果的关键。若环状光阑的光环和相差物锐中的相位环不能精准吻合会造成光路紊乱，应被吸收的光不能吸收，该推迟相位的光波不能推迟，失去相差偏光显微镜的效果。

    7.取下望远镜，换回目镜，选用适当放大倍数的物镜进行观察。