1.将偏光显微镜的聚光器换成暗视野聚光器。

    2.选用适当厚薄的载玻片(通常0.7-1.2 mm)及盖玻片(通常0.17 mm)。在载玻片上滴上酿酒酵母或大肠杆菌悬液后加盖玻片，制成水侵片。

    由干暗视好琅光廿的数值孔径值都较大(NA=1.2-1.4)，焦点较浅，因此，所选用的载玻片、盖玻片不宜太厚，否则被检物体无法调在聚光器焦点处。

    3.在聚光器上放一大消香柏油，并将制片放在镜台上。升起聚光器，使香柏油与载玻片接触。

    在进行暗视好观察时，聚光器与载玻片之间滴加的香柏油要充满，不能有气泡，否侧照明光线于聚光镜上面进行全面反射，达不到被检物体，从而不能得到暗视野照明。

    4.用低倍物镜(10x )调节亮度并康焦样品，将光像光圈关小，在照暗视野中观察到一亮环(图Ⅲ-13)。

    5.通过调节聚光器对中螺旋使亮环位于视野的中心，使聚光器与物镜的光轴一致。

    6.微调聚光器高度使亮环变成一亮斑，光斑越小越好，此时聚光器的焦点与标本一致，观察效果最好。逐步扩大光源光圈。使光斑扩大，并略大于视野。

    7.选用合适放大倍数的物镜.调节亮度并调焦进行观察。

    8.观察完毕，擦去获光路上的香柏油，并参照普通光学偏光显微镜的要求，妥善清洁镜头及其他部件。